首先，实验步骤1。
新生Wistar大鼠1-2天哺乳期大鼠，用75％酒精消毒，断头？
2）
您是否将大脑投入平衡的D Hanks冷盐溶液中以消除脑膜和大血管？
3）
？您是否要在两侧分开大脑皮层并将其切成1 mm3？
加上大小，0。
25％胰蛋白酶在37°C的空气浴中，可10分钟进行电击消化吗？
4）
用含有10％FBS的DMEM培养基停止消化，并通过离心（1000 rpm，10分钟）除去上清液。
5）
将沉淀物重悬于含有10％FBS的DMEM培养基中，通过75μm筛网过滤，收集滤液，再次离心10分钟，并将沉淀物重悬于含有FBS的DMEM培养基中。10％将细胞密度调整为1。
是否以75x2的5x106 / ml种植？
瓶子增长？
6）
通过差异粘附去除成纤维细胞1小时后，细胞悬浮液是否会转移到新的75 cm2？
继续培养培养瓶，每天更换两次液体。
7）
7天后，将烧瓶放入卧式摇床（260 rpm，2小时，37°C）中，通过液体交换弃去小胶质细胞，在培养箱中放置1小时，然后在卧式摇床中放置18小时
8）
通过液体交换丢弃少突胶质细胞，用新鲜培养基洗涤两次，并添加0。
0％25％胰蛋白酶。
02％EDTA1：一种消化混合物，交换合格吗？
二，倒置相差显微镜下的形态观察，观察细胞形态和生长情况？
3.将细胞生长曲线经过后的细胞以2×104 / ml的密度接种在24孔培养板中。每3天更换一次培养基，并每3小时计数细胞数，共7天。绘制平均增长曲线。
第四，星形胶质细胞胶质细胞（GFAP）中神经胶质蛋白的免疫组织化学鉴定。
从星形胶质细胞中除去培养基，用PBS洗涤3次，在室温下用4％多聚甲醛固定1小时，并且每次用PBS洗涤3次，每次5分钟。
3％H2O2？
去除内源性过氧化物30分钟，用PBS洗涤3次，每次5分钟，并添加0。
封闭5％TritonX-100山羊血清30分钟，在4°C下逐滴添加兔抗GFAP抗体（1:75）18小时，并用PBS洗涤3次，每次5分钟。室温下滴20分钟，洗涤PBS 3次，每次5分钟，用辣根酶标记的抗生蛋白链菌素工作液，室温下添加20分钟，PBS 3次，每次5分钟，DAB颜色还是？
五，结果1。
形态观察：在光学显微镜下，最后一颗恒星的神经胶质细胞具有很强的折射率和不规则的，主要是多边形的形状。细胞体大而扁平，细胞质丰富。细胞核是圆形或椭圆形，位于细胞体的侧面。人体具有一个或两个核仁，并具有几个短而短的树突状原代细胞过程。6-7天后，细胞融合成单层。如下所示，这与神经胶质细胞的生长特征一致。
星形胶质细胞胶质细胞单层生长（x100）图1：星形胶质细胞胶质细胞形成融合和单层生长（x200）？
2？
鉴定：被胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）染色的细胞超过98％在细胞质中被染色，但没有核染色。请参考下图。通过上述方法获得的细胞是星形胶质细胞，可以用于高纯度的实验。
图2：用GFAP 3染色的免疫组织化学鉴定。
细胞生长曲线是否绘制如下？
图3：细胞生长曲线？
