衣藻是单细胞的真核绿藻，是在光合作用，鞭毛/纤毛和生物能源领域进行研究的模型生物。
近年来，衣藻被用于抗体和疫苗的表达，并已引起生物医学研究的关注。
由于衣藻的同源重组频率低，反向遗传学研究主要依赖于siRNA和人工miRNA技术。人工miRNA技术具有高特异性和高效率的优点，是研究的重点。
然而，常规的人工miRNA表达载体具有诸如高昂的建造成本，复杂的操作，难以检测以及低干扰的缺点，从而限制了广泛的技术应用。
C，中国科学院水生生物研究所研究员。建立了在reinhardtii中使用人工miRNA敲除基因的技术平台。
该方法以内源性衣原体miRNA前体为支架，分别构建叶绿体相关VIPP1基因和鞭毛CDPK3基因的人工miRNA，并使用引物构建人工miRNA前体和构建方法。退火。单步荧光素酶基因融合表达：该方法达到了快速构建和筛选的目的。
具有操作简便，成本低，检测效率高的优点。
主要实验结果如下。（1）通过一步退火合成人工miRNA前体结构，并将荧光素酶基因和一步合成人工miRNA前体结构与下游表达融合。PsaD启动子。
通过检测萤光素酶活性或使用光接触相机直接成像，可以快速筛选去除靶基因的克隆。
目标蛋白VIPP1可以减少至野生型的22-74％。
（2）人工miRNA干扰的影响随着时间的推移而降低，所选的阳性克隆在第一个月表现出最佳的干扰效果。
（3）通过将内源RBCS2基因的内含子1或内含子3掺入荧光素酶基因和人工miRNA前体之间，荧光素酶活性与人工miRNA之间的干扰作用大大提高。
与没有内含子的阳性克隆相比，萤光素酶活性分别增加到333％或401％，与野生型相比，VIPP1目标蛋白的含量减少到5％或3％。
将内含子3整合到具有CDPK3靶基因的人工miRNA载体中，还可以减少野生型CDPK3靶蛋白。
（4）NIT1的诱导型启动子也可以应用于人工miRNA表达载体，并且通过将培养基中的氮源改变为氨基盐或硝酸盐来抑制或诱导干扰载体的表达。
这项研究建立的高效人工miRNA技术平台对于促进衣藻基因功能的研究具有重要意义，并且可以应用于其他模型生物。
这项研究主要由水产研究所的博士生Hu Jint int进行。通讯的作者是黄海亚研究员和王孝宏副研究员。
相关文档在衣藻中快速构建和检测人工microRNA系统已在ThePlantJournal在线发布。
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